蛋白ip实验-蛋白测定视频

本文目录一览：

• 1、IP在医学中什么意思
• 2、CoIP中IP,IB,HA都是什么(帮我看一下结果图)谢谢~
• 3、CoIP结果查看
• 4、ip蛋白和input哪个好检测

IP在医学中什么意思

IP是网络之间互连的协议，与医学没有任何关系；

IP是TCP/IP体系中的网络层协议。设计IP的目的是提高网络的可扩展性：一是解决互联网问题，实现大规模、异构网络的互联互通；

二是分割顶层网络应用和底层网络技术之间的耦合关系，以利于两者的独立发展。根据端到端的设计原则，IP只为主机提供一种无连接、不可靠的、尽力而为的数据报传输服务。

扩展资料：

IP位于TCP/IP模型的网络层(相当于OSI模型的网络层)，对上可载送传输层各种协议的信息，例如TCP、UDP等；对下可将IP信息包放到链路层，通过以太网、令牌环网络等各种技术来传送。[2]

为了能适应异构网络，IP强调适应性、简洁性和可操作性，并在可靠性做了一定的牺牲。IP不保证分组的交付时限和可靠性，所传送分组有可能出现丢失、重复、延迟或乱序等问题。

一个IP分组由首部和数据两部分组成。首部的前20字节是所有IP分组必须具有的，也称固定首部。在首部固定部分的后面是一些可选字段，其长度是可变的。

CoIP中IP,IB,HA都是什么(帮我看一下结果图)谢谢~

IP：immunoprecipitation 免疫沉淀（纯化目的蛋白）

IB：immunoblotting 免疫印迹，即Western Blotting（显示目的蛋白）

HA：带有HA标签的蛋白（抗HA抗体来显示目的蛋白）

Input：阳性对照，就是用IP之前的裂解液做IB（排除假阳性干扰）

这个实验结果说明：Pi13蛋白与AtCaM蛋白之间存在相互作用。

不懂，请追问。。。希望可以帮到你。祝您顺利毕业！

CoIP结果查看

文献信息：

Abe, T., et al. (2017). "Germ-Cell-Specific Inflammasome Component NLRP14 Negatively Regulates Cytosolic Nucleic Acid Sensing to Promote Fertilization." Immunity 46 (4): 621-634.

先看一下图中的缩写：

IP全称是immunoprecipitation，即免疫沉淀，这一步主要是为了纯化目的蛋白。

IB全称是immunoblotting，即免疫印迹，也就是常规的Western Blotting，用于显示目的蛋白。

WCL全称是whole cell lysates，即整个细胞的裂解成分。

HC全称是heavy chain，即重链，

LC全称是light chain，即轻链。

将图分为三部分，先看第一部分，即上面的部分，“+”表示含有这种蛋白，“-”表示没有，这个实验一共做了四组，从左到右分别为：①只表达HA-cGAS的293T细胞；②共同表达HA-cGAS与NRLP14-FL的293T细胞；③只表达STING-HA的293T细胞；④共同表达STING-HA与与NRLP14-FL的293T细胞，如下所示：

再看第二部分WB的图，WB的图就是使用含有FLAG抗体的珠子拉下来的蛋白做的，使用拉下来的这些蛋白再做WB，它的原理前面已经描述过了。使用FLAG抗体的珠子拉下来的蛋白使用HA抗体来进行检测，其结果如下：

从上面的图像可以看出以下信息：

第一， HC与LC条带都非常明显，之所以出现这个条件是因为，在WB之前进行的蛋白变性这一步，由于加样缓冲液中含有巯基乙醇，巯基乙醇会把抗体的重链和轻链之间的二硫键破坏，从而使的抗体变成重链分子55KD和轻链分子25KD，因此会在结果中呈现两个条带。

第二， 第一组（只表达HA-cGAS的293T细胞）中没有条带，第二组（共同表达HA-cGAS与NRLP14-FL的293T细胞）没有条带，第三组（只表达STING-HA的293T细胞）有一点点条带，第四组（共同表达STING-HA与与NRLP14-FL的293T细胞）条带明显，这说明NLRP14与STING有相互作用，为什么说有相互作用呢？因为我们是用FLAG抗体来拉的蛋白，从理论上讲，我们只能拉下FLAG标记的NLRP14，也就是NLRP14-FL（FL就是FLAG），但是，从拉下的蛋白中用HA进行检测，居然检测出来了HA标记的STING，这就说明，使用FLAG拉NLRP14-FL时，这个蛋白复合物中含有STING-HA。

再看图的第三部分，也就是下面的这一部分，是用FLAG抗体和HA抗体来进行检测整个细胞的裂解液，是作为阳性对照（有的文献中会标明input组），如下所示：

其中右侧的WCL表示的是整个细胞的裂解液，也就是还没有使用FLAG抗体的珠子去拉的时候的样本，也就是说直接裂解了293T细胞后的样本，从这个结果中可以得到以下信息：

第一， 在使用FLAG抗体进行检测全蛋白时，相当于阳性对照。第一组（只表达HA-cGAS的293T细胞）中没有条带，因为这种293T细胞中只有HA标记的cGAS，第二组（共同表达HA-cGAS与NLRP14-FL的293T细胞）有条带，因为FLAG抗体能检测出使用了FLAG标记的NLRP14，NLRP14的蛋白分子量大概是125kD，第三组（只表达STING-HA的293T细胞）没有条带，因此这种293T细胞只表达HA标记的STING；第四组（共同表达STING-HA与与NLRP14-FL的293T细胞）条带明显，因为这个细胞中含有FLAG标记的NLRP14。

第二， 使用HA抗体检测全蛋白，这是阳性对照，是说明细胞中含有相应的蛋白。我们可以发现，第一组（只表达HA-cGAS的293T细胞）在27kD附近没有条件，在50kD部分有条带，这说明，全蛋白中含有HA标记的cGAS（cGAS的蛋白分子量是62kD，多数蛋白标签的分子量很少，基本可以忽略），做这个实验主要是作为阳性对照；第二组（共同表达HA-cGAS与NLRP14-FL的293T细胞）在37kD附近没有条带，在50kD附近有条带；结合前面的结果来看，就说明这个细胞中含有HA标记的cGAS（因为它的分子量大概是50kD），还含有FALG标记的NLRP14（因为NLRP14的蛋白分子量大概是125kD）；第三组（只表达STING-HA的293T细胞）在37kD处有条带，这说明细胞中含有HA标记的STING（因为STING的分子量大概是35kD）；第四组（共同表达STING-HA与与NLRP14-FL的293T细胞）在110kD处有条带，在37kD处也有条带，这说明这种细胞中含有NLRP14与STING。

从上面的图片可以知道，在做Co-IP实验时。需要设立阳性对照组来证明你的细胞中有某个蛋白A与B，再使用抗蛋白A的抗体来拉A蛋白，再使用抗蛋白B的抗体来检测拉下来的蛋白，如果检测到了蛋白B，就说明蛋白A与蛋白B有相互作用。

ip蛋白和input哪个好检测

IP（免疫共沉淀）和input（输入）是两种常见的蛋白检测方法，各有优缺点，应根据实际需要进行选择。

IP方法是通过特异性抗体与目标蛋白结合，将目标蛋白从样品中共沉淀下来，然后进行分析。这种方法可以选择性地富集目标蛋白，因此对于目标蛋白含量低、存在于复杂样品中的情况，具有很好的检测效果。但是，IP方法需要有特异性抗体，且操作流程比较繁琐，需要较长的时间。

而input方法则是直接将样品分析，不需要进行富集。这种方法操作简单、快速，但对于目标蛋白含量低、存在于复杂样品中的情况下，检测灵敏度和特异性可能不如IP方法。

因此，如果目标蛋白含量较低、存在于复杂样品中，或需要进行定量分析时，可选择IP方法；如果目标蛋白含量较高、样品较简单，或需要快速检测时，可选择input方法。